Pruebas de sensibilidad antibiótica in vitro
Las pruebas de sensibilidad antibiótica in vitro son realizadas por los profesionales de farmacia con amplios conocimientos en infectología.
facultad de farmacia · infectología para farmacia
mié. 09 de jun. 2021
0

El estudio de las pruebas de sensibilidad antibiótica in vitro se realizan mediante métodos que evalúan la acción de una variedad de agentes antimicrobianos bajo condiciones específicas estandarizadas. Su realización es una importante función del laboratorio de microbiología clínica y sus resultados tienen un interés terapéutico y epidemiológico.

Contribuye a elegir o avalar un tratamiento, al mismo tiempo que permite generar bases de datos que ayudan a seleccionar tratamientos empíricos. Dichos resultados también se utilizan para desarrollar políticas de uso de antibióticos, para vigilar la aparición de nuevos mecanismos de resistencia y para detectar precozmente la diseminación epidémica de cepas, tanto a nivel hospitalario como comunitario.

Estos estudios se realizan a los aislamientos clínicamente significativos y la efectividad de los resultados radica en su correcta interpretación y valoración. Para ello son necesarios la comunicación y el trabajo conjunto del microbiólogo y del infectólogo. Desde la introducción de los antibióticos, los microorganismos han desarrollado mecanismos de resistencia con la consecuente pérdida de sensibilidad a los agentes con actividad natural. Los patrones de resistencia cambian en forma constante y resulta difícil predecir la sensibilidad microbiana.

Las infecciones causadas por bacterias resistentes pueden no responder bien al tratamiento y se asocian a una peor evolución del paciente, con mayores complicaciones, aumento de la mortalidad, de la estancia hospitalaria y mayores gastos para los sistemas de salud. Así, un objetivo de las pruebas de sensibilidad (PSA) es predecir la evolución del tratamiento con los agentes antibióticos probados.

Aunque el éxito del tratamiento dependa también de la condición clínica del huésped, de la existencia de enfermedades subyacentes, de las propiedades farmacológicas del antimicrobiano y de la administración de terapéuticas adicionales, la actividad antibacteriana in vitro es una información importante en la decisión del tratamiento antibiótico.

Métodos de estudio de susceptibilidad antimicrobiana

Las PSA se realizan para los aislamientos significativos de un caso en estudio, para probar antibióticos de actividad impredecible cuya resistencia podría generar inconvenientes en el tratamiento del paciente y cuando se dispone de un método estandarizado. No se deben hacer para bacterias colonizantes ni contaminantes. Se dispone de métodos estandarizados para la mayoría de las bacterias de importancia clínica humana, pero faltan para las que son poco frecuentes o muy exigentes desde el punto de vista nutricional.

Se prueban e informan los antibióticos más apropiados a cada situación, según el organismo aislado, el sitio de infección, los requerimientos de la práctica clínica, las características del paciente y la probabilidad de encontrar organismos resistentes. También se incluyen agentes subrogantes con mayor capacidad para detectar resistencia a drogas muy relacionadas. Hay PSA cualitativas y cuantitativas.

Es habitual que los resultados se informen de acuerdo a las categorías sensible, resistente o intermedio. La categoría sensible indica una muy alta probabilidad de que el paciente responda de modo favorable a las dosis recomendadas del antibiótico.

La categoría intermedia se interpreta según las circunstancias, puede significar que para asegurar la eficacia del antibiótico se deberá administrar dosis más altas que las habituales, siempre que el umbral de toxicidad lo permita; o que la droga puede ser eficaz si concentra adecuadamente en el sitio de la infección, de otro modo, se deben tomar precauciones respecto al uso de la misma; o que la bacteria no se puede clasificación en forma certera respecto al antibiótico en cuestión. Por su parte, los pacientes con las infecciones causadas por bacterias resistentes tienen menos probabilidades de tener una respuesta óptima al tratamiento.

Métodos para realizar PSA

Existen varios métodos para realizar PSA, entre ellos difusión de discos, macrodilución, microdilución, dilución en agar, difusión de gradiente de antibióticos, métodos automatizados y moleculares.

Método de difusión de discos

Consiste en inocular una placa de medio de cultivo con una suspensión de la bacteria en estudio, para luego aplicar discos de papel impregnados en antibióticos sobre dicho medio. La placa se incuba a 35º C durante 16-24 horas. Durante la incubación el antibiótico difunde del disco al medio de cultivo y se genera un gradiente a su alrededor mientras, la bacteria sembrada desarrolla en las áreas donde la concentración de antibiótico es sub inhibitoria.

De esa manera, se generan zonas de inhibición del desarrollo bacteriano alrededor de los discos. Estas zonas son función de la actividad del antibiótico sobre la bacteria y de propiedades físico-químicas que afectan la difusión de la droga. Tras la incubación, se mide el diámetro de los halos de inhibición y se interpretan los resultados con el empleo de tablas de estandarización pertinentes y se categoriza la cepa en estudio como sensible, intermedio o resistente a cada droga analizada.

Este método permite probar varios antibióticos en simultaneidad, es reproducible, no requiere equipamiento especial, tiene bajo costo y la ventaja de ser flexible en lo referente a la selección de las drogas, a los cambios de criterios de interpretación y a la introducción de nuevos antibióticos. La prueba está estandarizada. Se encuentra normalizado el medio de cultivo (Muller-Hinton), su composición y profundidad en la placa de Petri; el inóculo y la manera de aplicarlo; la carga de antibióticos en los discos, su conservación y modo de aplicación; las condiciones de incubación, lectura e interpretación.

Existen equipos automatizados para la lectura e interpretación de los halos de inhibición. Dan resultados reproducibles y en general, adecuados. El método de difusión de discos tiene algunos inconvenientes y limitaciones: solo algunas drogas se encuentran validadas para Stenotrophomonas maltophilia y Burkholderia cepacia.

Método de difusión de tiras con gradiente de antibiótico (prueba del epsilómetro)

Este es un método cuantitativo. Es una modificación del método de difusión de discos, con la gran ventaja que da el valor de la CIM como resultado. Dicha modificación radica en utilizar una tira plástica graduada, la cual contiene el antibiótico distribuido a modo de gradiente a lo largo de su extensión. Al aplicar la tira sobre el medio de cultivo previamente sembrado, el antibiótico difunde en forma inmediata y se crea un gradiente exponencial de concentraciones a lo largo de la tira.

Después de la incubación, se genera a su alrededor una zona de inhibición del desarrollo bacteriano. La CIM será el valor indicado sobre la tira en el punto de su intersección con el desarrollo bacteriano. Es una prueba sencilla, con buena correlación con los estándares y además permite probar la sensibilidad de bacterias anaerobias y otras de difícil desarrollo.

Dilución en caldo

Una suspensión estandarizada de la bacteria en estudio se expone a diluciones seriadas al medio del antibiótico en estudio. Se incuba a 35º C durante 18-24 horas. La lectura se hace por comparación de cada dilución con controles positivo y negativo. La CIM e la menor concentración que inhibe el desarrollo bacteriano. El estudio se puede hacer en tubos (macrodilución) o en microplacas (microdilución).

Este método cuantitativo tiene el inconveniente de ser laborioso, y en el caso de la macrodilución, requiere una cantidad considerable de materiales para probar un antibiótico para una cepa. La microdilución permite probar varios agentes simultáneamente. Los resultados de las CIM se interpretan con tablas de referencia como se mencionó con anterioridad. Su realización se facilita por el uso de paneles comerciales congelados o deshidratados, cuya lectura es visual o a través de equipos automatizados.

Dilución en agar

Es un método laborioso, pero bien estandarizado y se usa para probar diluciones de un antibiótico frente a varios aislamientos en forma simultánea. Es el método de referencia internacional para determinar la CIM (salvo para daptomicina) y aplica a bacterias anaerobias. Consiste en preparar una serie de placas con el medio de cultivo estandarizado, el cual debe contener concentraciones crecientes del antibiótico a evaluar. Cada placa se inocula con los microorganismos en estudio y luego de su incubación, se examinan para registrar el crecimiento bacteriano y determinar la CIM.

El especialista en farmacia

TECH Universidad Tecnológica se posiciona como la mayor universidad virtual del mundo. Por esta razón existe una diversidad de programas dentro de sus facultades. Tal es el caso de su Facultad de Farmacia donde se pueden hallar especializaciones tales como la Maestría en Elaboración y Desarrollo de Medicamentos Individualizados y la Maestría en Dirección y Monitorización de Ensayos Clínicos. Por otra parte, para aquellos profesionales enfocados en el área de las enfermedades infecciosas, su mejor elección para complementar su carrera profesional será la Maestría en Enfermedades Infecciosas y Tratamiento Antimicrobiano para Farmacia.

Artículos relacionados

1 /

Compartir